Tema: La metilación del miARN m6A mediada por metiltransferasa 3 promueve la formación de gránulos de estrés oxidativo en la etapa inicial del accidente cerebrovascular
Mecanismo epigenómico tratado: Metilación de microRNA 335
Como se lo hizo: In vitro
1. Cultivo de células neuronales de la corteza de roedores neonatales (ratas Sprague-Dawley) y de células PC12
2. Sometimiento del cultivo a condiciones de lesión de oxígeno-glucosa (OGD) e inducción de infarto
3. Mediante sistema CRISP-cas 9 se insertaron los plásmidos pCDH-CMV-METTL3 para expresar la función de la proteína metiltransferasa 3 (esta enzima inserta N6-metiladenosina para la maduración de miRNA 335 al insertar N6-metiladenosina)
4. Transfección del miRNA 335 homotípico a las células del cultivo
5. Técnica de inmunofluorescencia de doble marcado para antígeno intracelular de células T (TIA1) y para la proteína 1 ligadora a proteína activadora de GTPasa (G3BP1), marcadores funcionales de los gránulos de estrés
6. Extracción de proteínas y RNA de las células del cultivo para analizar por RT-PCR y electrotransferencia
Resultados:
1. La metilación a través de la enzima METTL3 aumenta la producción y maduración de miR- 335 en un 59.5% en las células cultivadas, promueve la formación de SG y reduce el nivel de apoptosis de las neuronas y células lesionadas
2. La inmunofluorescencia demostró la formación de gránulos de estrés en un 57.6% en las células cultivadas
3. El miRNA 335 degrada el mRNA del factor de terminación de la traducción eucariota (Erf1), conllevando a un arresto de la traducción y forma los gránulos de estrés
4. Los gránulos de estrés son importantes al detener la traducción de importantes proteínas y ARN mensajeros, ya que los protege durante la etapa aguda del accidente cerebrovascular
Fuente: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7289951/
